African Journal of
Microbiology Research

  • Abbreviation: Afr. J. Microbiol. Res.
  • Language: English
  • ISSN: 1996-0808
  • DOI: 10.5897/AJMR
  • Start Year: 2007
  • Published Articles: 4986

Full Length Research Paper

Development and application of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using a soluble recombinant nucleoprotein for the detection of antibodies to avian influenza virus

Mariana Monezi Borzi*
  • Mariana Monezi Borzi*
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Ketherson Rodrigues Silva
  • Ketherson Rodrigues Silva
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Maria de Fatima Silva Montassier
  • Maria de Fatima Silva Montassier
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Filipe Santos Fernando
  • Filipe Santos Fernando
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Maria de Lourdes Feres Tamanine
  • Maria de Lourdes Feres Tamanine
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Romeu Moreira dos Santos
  • Romeu Moreira dos Santos
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Elisabete Schirato de Oliveira
  • Elisabete Schirato de Oliveira
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Viviane Casagrande Mariguela
  • Viviane Casagrande Mariguela
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Priscila Diniz Lopes
  • Priscila Diniz Lopes
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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Dilmara Reischak
  • Dilmara Reischak
  • National Agricultural Laboratory (LANAGRO), Campinas, São Paulo, Brazil.
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Andre Oliveira Mendonca
  • Andre Oliveira Mendonca
  • National Agricultural Laboratory (LANAGRO), Campinas, São Paulo, Brazil.
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Renato Luis Luciano
  • Renato Luis Luciano
  • Advanced Center for Technological Research of Poultry Agribusiness /Biological Institute, Descalvado, São Paulo, Brazil.
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Helio Jose Montassier
  • Helio Jose Montassier
  • Laboratory of Immunology and Virology, Department of Veterinary Pathology, São Paulo State University (Unesp), School of Agricultural and Veterinarian Sciences, Jaboticabal, São Paulo, Brazil.
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  •  Received: 06 December 2016
  •  Accepted: 23 March 2017
  •  Published: 14 May 2017

Abstract in Portuguese

A Influenza aviária (IA) causa um impacto significativo na avicultura industrial, além de infectar uma variedade de vertebrados. A detecção de anticorpos contra antígenos virais por métodos sorológicos é importante para a epidemiologia, controle e prevenção da IA, devido à sua simplicidade e rapidez para a análise de um grande número de amostras. A obtenção de preparações antigênicas utilizadas para a detecção de anticorpos anti vírus da influenza aviária (VIA) requer habitualmente procedimentos complexos e dispendiosos e, a expressão de proteínas em Escherichia coli, pode ser uma alternativa. A nucleoproteína (NP) do VIA é candidata a ser um antígeno ideal porque é altamente conservada entre as estirpes do VIA, resultando em alta reatividade cruzada e imunogenicidade para hospedeiros aviários. Um segmento do gene NP foi clonado e expresso nesse estudo a partir de um isolado do subtipo H4N6 do VIA em E. coli fusionado com um pequeno polipeptídeo modificador de ubiquitina (SUMO) e uma etiqueta constituída por poli-histidina, obtendo-se uma NP recombinante solúvel (rNP) contendo os epítopos mais importantes dessa proteína. Após a purificação, a rNP foi utilizada como antígeno para desenvolver um método indireto de ELISA (rNP-ELISA) para detectar de forma eficaz anticorpos anti-VIA em amostras de soro de galinha. Esse método de rNP-ELISA apresentou alta sensibilidade (95%), especificidade (97%), acurácia (96,7%) e concordância (k = 0,88) em uma análise comparativa com um kit comercial de ELISA usado para a detecção de anticorpos de galinha anti-VIA. Os resultados indicam que o rNP-ELISA constitui-se em uma alternativa viável para aprimorar o imunodiagnóstico da infecção por VIA em galinhas. Palavras-chave: expressão em Escherichia coli, modificador pequeno tipo ubiquitina (SUMO), imunodiagnóstico, avicultura.